Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

• 作者: 刘爱华 姜勇 明小燕 梅柱中 王丹 王旭 王达安
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: septin8 红色荧光蛋白 载体构建 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 120-122,136,封2
• 页数: 5页
• 分类号: R329.28
• 语种: 中文

摘要

目的 构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况.方法 采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位.结果 重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆.结论 成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础.