疏绵状嗜热丝孢菌糖化酶基因(gla)的克隆及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 张亚波 张超 徐荣燕 李多川 谢晨
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 疏绵状嗜热丝孢菌 糖化酶 克隆 毕赤酵母 性质
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 362-367
• 分类号: Q94
• 字数: 4893字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.02.026

摘要

本研究以疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces laltltginosus)cDNA为模板,克隆了糖化酶基因(gla),序列分析表明gla的开放阅读框由1854个核苷酸组成,编码617个氨基酸.根据氨基酸序列推算该酶的分子量为64 kD,属于糖苷水解酶第15家族,具有该家族催化保守区的典型特征.PCR扩增gla的成熟蛋白编码基因,构建表达载体,经线性化后电击转化导入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris GS115),并成功进行了表达.重组酶经摇瓶发酵后酶活可达11.6 U/mL,经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换等步骤纯化了该重组蛋白,SDS-PAGE显示该重组蛋白大小约为67kD,比推测的蛋白分子量稍大,可能与该蛋白的糖基化有关.该重组酶的最适反应温度和最适pH值分别为60℃和5.0,该酶具有较高的热稳定性,70℃保温20 min后剩余酶活为54%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李多川	山东农业大学植物保护学院环境生物系	73	827	17.0	23.0
2	张超	山东农业大学植物保护学院环境生物系	35	230	7.0	14.0
3	徐荣燕	山东农业大学植物保护学院环境生物系	3	31	3.0	3.0
4	张亚波	山东农业大学植物保护学院环境生物系	3	19	2.0	3.0
5	谢晨	山东农业大学植物保护学院环境生物系	2	13	2.0	2.0