糖化酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达

• 作者: 李桂英 王智 田谷 赵萱 路明 顾金刚 顿宝庆
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 糖化酶 木聚糖酶 融合表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 83-88
• 分类号: Q78
• 字数: 4847字
• 语种: 中文

摘要

通过RT-PCR方法,以埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)总RNA为模板,克隆出糖化酶(glucoamylase,amyA)基因的成熟肽编码序列(1 857 bp),编码618个氨基酸；以类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)H10-3基因组DNA为模板,克隆出木聚糖酶(xylanaseA,xynA)基因的成熟肽编码序列(636 bp),编码211个氨基酸.通过重叠延伸PCR( SOE-PCR)得到拼接片段amyA-l-xynA,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,得到重组质粒pPIC9-amyA-l-xynA,重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,得到了表达成功的工程菌ALX2.在ALX2发酵上清液中同时检测到糖化酶活性(10.7 U/mL)和木聚糖酶活性( 51.8 U/mL).