马乙型脑炎病毒E蛋白的原核表达及间接ELISA的初步应用

• 作者: 曲娟娟 欧阳凤菊 王世泽 王宇 田志革 相文华 郭巍
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 马乙型脑炎 E蛋白 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 624-627,631
• 页数: 5页
• 分类号: S852.652
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达马乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)E蛋白,建立JEV间接ELISA诊断方法.方法 根据GenBank(AF315119.1)公布的JEV SA 14-14-2株E蛋白基因序列设计一对引物.提取病毒RNA经反转录和RT-PCR扩增获得E蛋白编码基因片段,将该片段插入表达载体pET30a(+).转化BL21(DE3)后经IPTG诱导蛋白表达,Western blot检测活性.以表达的E蛋白为包被抗原建立间接ELISA诊断方法.结果 获得约1 500 bp目的片段,与GenBank上的序列同源性100%,其表达产物相对分子质量约为60 000,Western blot结果显示该蛋白可与JEV阳性血清结合,具有免疫反应性.建立了间接ELISA检测方法,对不同省份的340份马血清进行检测,其中154份为阳性.结论 原核表达JEV的E蛋白具有良好的免疫活性,建立的间接ELISA诊断方法特异性和灵敏性较好,可用于JEV的现地检测.