Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 向星宇 姜茂竹 宋艳斌 王妮莎 郑文岭 马文丽
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Hsa-mir-196b 慢病毒 肿瘤
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 513-515,封2
• 分类号: R73
• 语种: 中文

摘要

目的 构建Has-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法 以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因.通过却Hpa I/Xho I双酶切及其后的连接将其插入Lentilox 3.7(pLL-3.7)质粒中.PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pLL-3.7-mir-196b、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒系统共感染HEK-293FT细胞,包装生产慢病毒.将所得病毒悬液梯度稀释后感染HEK293FT细胞,以检测病毒滴度,并用实时定量PCR检测慢病毒感染后Has-mir-196b的表达变化.结果 PCR及测序结果证明成功构建了pLL-3.7-mir-196b重组质粒.所得慢病毒上清滴度为(7.2±101)×107TU/ml.感染慢病毒的239FT细胞中,Has-mir-196b的表达量相对于未感染细胞提高了约24倍.结论 成功构建Has-mir-196b慢病毒表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马文丽	南方医科大学基因工程研究所	275	1255	15.0	23.0
2	郑文岭	南方医科大学基因工程研究所	121	603	11.0	20.0
6	王妮莎	南方医科大学基因工程研究所	7	15	3.0	3.0
7	宋艳斌	南方医科大学基因工程研究所	32	167	7.0	11.0
8	向星宇	南方医科大学基因工程研究所	4	4	1.0	2.0
9	姜茂竹	南方医科大学基因工程研究所	13	19	2.0	3.0