卵巢打点注射质粒pIRES2-EGFP生产转基因兔的研究

• 作者: 冯静 宋天增 张红琳 曾宪垠 杨井泉 杨剑波 杨华 石国庆 贾斌 陈永耀 韩猛立 黄新
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 打点注射 卵巢 转基因兔
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 1711-1719
• 分类号: S829.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4829.2010.05.069

摘要

本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法.选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5～0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行人工辅助配种;卵巢注射后第3日、第16日和31日随机各取1只雌兔卵巢做冰冻切片,置荧光显微镜下观察绿色荧光;应用PCR 和 Southern 杂交检测转基因新生仔兔阳性率.结果经荧光显微镜观察,卵巢注射后第3日配种的雌兔卵巢冰冻切片及48 h以后的胚胎呈现绿色荧光;卵巢注射报告基因后第3日配种的雌兔后代阳性率最高,PCR 和 Southern 杂交检测结果分别为72.7 %和45.5 %;第31日配种的后代阳性率最低,分别为36.8 %和15.8 %;第16日配种、第3日配种和第31日配种雌兔的阳性后代数量呈递减趋势.卵巢注射后第3日配种,虽然后代阳性率较高,但是其产仔数最少.实验结果表明,用注射器直接对卵巢打点注射外源基因生产转基因兔的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础.