携带人VEGF_(165)和ANG-1双基因的腺病毒载体的构建及目的基因的表达

• 作者: 刘建 孟国林 张金康 李国臣 段春光 毕龙 白峰 禚文昆 胡蕴玉 袁志 黄鑫
• 来源期刊: 中国矫形外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮细胞生长因子165 血管生成素-1 腺病毒载体 基因转染
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 312-315
• 页数: 4页
• 分类号: R687
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建并鉴定携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF_(165))和血管生成素-1(ANG-1)双基因共表达重组腺病毒载体pAd-VIA.[方法]采用基因克隆技术克隆目的基因VEGF_(165)、ANG-1基因,将得到的基因通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),亚克隆至含有报告基因EGFP的穿梭载体pTrack-CMV中,构建携带双基因的腺病毒穿梭载体pTrack-CMV-VIA.进而使用AdEasy~(TM)腺病毒系统重组并包装腺病毒.通过绿色荧光蛋白(GFP)表达、酶联免疫吸附分析(ELISA)方法检测制备的腺病毒pad-VIA感染的大鼠骨髓基质干细胞中外源基因VEGF_(165)及Ang-1的表达.[结果]该藿组腺病毒质粒经测序、酶切鉴定,证明基因序列正确.转染QBI-293A细胞后,可观察到GFP明显表达.重组合腺病毒载体pad-VIA获得成功包装,扩增后病毒滴度为2×10~(10)PFU/ml,大鼠骨髓基质干细胞转染48 h后,绿色荧光蛋白表达阳性,ELISA结果显示转染组在感染48 h后,培养细胞上清中的VEGF_(165)浓度为(42.5±2.082)ng/10~5细胞,ANG-1浓度为(16.67±2.08)ng/10~5细胞,未转染组几乎未检测到外源基因的表达,有统计学差异(P<0.05).[结论]成功构建携带人VEGF_(165)、ANG-1双基因共表达重组腺病毒载体,为组织工程人工骨血管化的研究奠定基础.