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SEB基因定位突变体构建及其重组表达产物生物学活性研究
SEB基因定位突变体构建及其重组表达产物生物学活性研究
作者:
严杰
于小妹
毛亚飞
范芳华
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
葡萄球菌肠毒素B
SEB基因/定位突变
原核表达系统/构建
重组蛋白/细胞毒性
摘要:
目的 构建葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因及其突变体原核表达系统,了解突变前、后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法 采用突变引物PCR构建SEB基因定位突变体,建立SEB基因及其定位突变体原核表达系统;同时采用Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的 重组蛋白;采用TCID50法测定目的 重组蛋白对Vero细胞的毒性;采用MTT比色法分别检测不同浓度的目的 重组蛋白促使小鼠脾细胞增殖及对抑制KB和HL-60癌细胞株生长的作用.结果 所克隆的SEB基因核苷酸序列与各项研究报道的相似性为100%,3种突变体均在既定位置获得预期的密码子突变.rSEB和各突变体重组蛋白表达量约为细菌总蛋白的40%;rSEB对Vero细胞TCIC50为3.4μg,其突变体重组蛋白分别为3.2~16.8μg;1和5μg/ml的rSEB及突变体重组蛋白rSEB/D9N对小鼠脾细胞均有明显的促增殖作用(P<0.05),10和20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N促进小鼠脾细胞增殖活性与100μg/ml植物血凝素PHA相似(P>0.05).5~20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N作用的小鼠脾细胞上清液及其上清液与脾细胞混合物均能有效抑制KB和HL-60细胞生长(P<0.05).结论 本研究成功构建了SEB基因突变体及其高效原核表达系统;其中突变体重组蛋白rSEB/D9N细胞毒性较低,促脾细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长活性较强,可作为研制升高白细胞、抗肿瘤的SEB相关药物的候选突变体.
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文献信息
篇名
SEB基因定位突变体构建及其重组表达产物生物学活性研究
来源期刊
浙江医学
学科
医学
关键词
葡萄球菌肠毒素B
SEB基因/定位突变
原核表达系统/构建
重组蛋白/细胞毒性
年,卷(期)
2010,(12)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
1741-1746
页数
分类号
R3
字数
4723字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1006-2785.2010.12.004
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
严杰
浙江大学医学院病原生物学系
265
1149
14.0
20.0
2
毛亚飞
浙江大学医学院病原生物学系
41
232
9.0
12.0
3
于小妹
浙江医院检验科
43
226
8.0
13.0
4
范芳华
浙江医院检验科
17
43
5.0
6.0
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节点文献
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1990(1)
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2010(0)
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二级参考文献(0)
引证文献(0)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
葡萄球菌肠毒素B
SEB基因/定位突变
原核表达系统/构建
重组蛋白/细胞毒性
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
浙江医学
主办单位:
浙江省医学会
出版周期:
半月刊
ISSN:
1006-2785
CN:
33-1109/R
开本:
大16开
出版地:
浙江省杭州市武林广场浙江省科协大楼十一楼
邮发代号:
32-9
创刊时间:
1979
语种:
chi
出版文献量(篇)
14571
总下载数(次)
5
总被引数(次)
33732
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