组氨酸标签人β干扰素在E.coli BL21(DE3)中的表达、纯化和活性测定

• 作者: 余腾斐 朱元军 杜郁 洪斌 王丽 王丽非 王松梅
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 干扰素β 重组融合蛋白质类 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 12-17
• 分类号: R4
• 字数: 5046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.01.004

摘要

目的 在大肠杆菌中高效表达组氨酸标签与人β干扰素融合蛋白,并进行蛋白纯化和生物活性测定.方法 提取人Bel-7402细胞总DNA为模板,经PCR获得人β干扰素编码基因片段.将此基因插入表达载体pET-16b,重组克隆,经酶切与测序确认后转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达和条件优化.表达产物经Western blotting分析,用Ni sepharose亲和层析纯化,纯化产物进行干扰素生物学活性测定.结果 经表达条件优化后,SDS-PAGE显示重组菌株表达与组氨酸标签人β干扰素分子量大小一致的条带,进一步的Western blotting分析中发现表达的蛋白能与人β干扰素抗体及组氨酸标签抗体产生结合反应,亲和层析纯化分离得到纯度92%的组氨酸标签人β干扰素,干扰素生物学活性测定表明,获得的组氨酸标签人β干扰素比活性为4.2×107U/mg.结论 组氨酸标签人β干扰素编码基因在大肠杆菌中成功表达.建立了该蛋白的简便亲和纯化方法,表达产物具有人β干扰素生物学活性,为进一步以此系统表达及纯化其他具有生物学活性的科研用标签化细胞因子奠定了基础.