标记蛋白HPT的表达、纯化及免疫活性鉴定

• 作者: 张海燕 范海 高彬
• 来源期刊: 植物研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 潮霉素磷酸转移酶 原核表达 重组蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 56-60
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

构建含有HPT的原核表达质粒,经诱导表达纯化后获得HPT抗体.从含有hpt的质粒pCambia1301上扩增日的基因,经Sal Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后与原核表达载体pET-28b(+)进行粘性末端连接,成功构建了pET-28b-hpt质粒,并转化到宿主细菌大肠杆菌Rosset(DE3)中进行蛋白表达.在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET-28b-hpt原核表达载体在E.coli Rosset菌株中以包涵体的形式高效表达了HPT蛋白,并以纯化的目的蛋白为抗原免疫兔制备了多克隆抗体.利用本方法可以获得特异性强、灵敏度高的多克隆抗体.