氧化还原因子-1的原核表达纯化及其活性鉴定

• 作者: 丁正中 张璐 李涛
• 来源期刊: 浙江师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 氧化还原因子-1 融合蛋白 原核表达 亲和色谱法
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 333-338
• 分类号: Q786
• 字数: 3445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5051.2011.03.019

摘要

为建立氧化还原因子-1（Ref-1）的原核表达系统,将经过酶切后的人源Ref-1编码片段定向克隆到pGEX-4T-3载体上,构建了pGEX-4T-3/Ref-1原核表达载体,重组质粒转化至BL21(DE3)工程菌,异丙基.-β-D- 硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组工程菌表达可溶性融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B（Glutathione Sepharose 4B）亲和纯化重组蛋白,透析后用聚乙二醇8000( PEG8000)浓缩,获得纯度达92％的融合蛋白,产率为3.7mg/L,融合蛋白占菌体总蛋白的6.8％.蛋白质印迹(Western blot)显示该蛋白可以被抗体特异性识别,证实其为GST-Ref-1融合蛋白.GST-Ref-1蛋白体外增强了激活蛋白-1(AP-1)的DNA结合能力,并能拮抗H2O2造成的AP-1氧化损伤.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李涛	浙江师范大学化学与生命科学学院	39	126	5.0	10.0
2	丁正中	浙江师范大学化学与生命科学学院	2	5	1.0	2.0
3	张璐		2	1	1.0	1.0