人血管内皮生长因子165慢病毒载体的构建及其抗放射所致细胞凋亡的作用

• 作者: 刘中霖 刘军 吕瑞妍 肖颂华 赵仲艳 邢诒刚 韦映梅 黎祥喷
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人血管内皮细胞生长因子 慢病毒 载体构建 HT22细胞 放射治疗
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 页码范围: 576-581
• 分类号: R747.9
• 字数: 4366字
• 语种: 中文

摘要

摘要:[目的]构建人血管内皮生长因子165 (hVEGF165)慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,并转染至HT22细胞,并迸一步观察其对放射线损伤所致的细胞凋亡的保护作用.[方法]PCR扩增hVEGF165基因,克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体；通过酶切电泳,菌落PCR初步筛选和测序鉴定构建的pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165重组载体；采用磷酸钙共转染法转染293T细胞包装制备慢病毒液,并感染HT22细胞,采用实时RT-PCR及Western Blot检测hVEGF165基因在HT22细胞中的表达情况.进一步对单纯HT22细胞、空质粒转染组以及hVEGF165转染组HT22细胞进行0、5、10 Gy的X线照射,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]hVEGF165基因片段重组到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,酶切后电泳结果显示均能得到与理论大小相符的片段,测序结果与GenBank序列完全一致,转染HT22后hVEGF mRNA及蛋白表达水平明显增高.而且同各对照组相比,hVEGF165可以降低细胞放疗后的凋亡率.[结论]pCDH-CMV-MCS-EF1 -copGFP-hVEGF165慢病毒表达载体构建成功,其转染HT22细胞后可获得高水平hVEGF165 mRNA和蛋白的表达,hVEGF165具有抗放射所致细胞凋亡的作用.