Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建

• 作者: 付晓 刘欣 朱梦瑜 杨洁 王保亚 王鑫廷 苏超 钱宝鑫 高星杰
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类Tudor-SN蛋白 SN5 pEGFP-C2 结构预测 拼接 重组质粒 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 204-209
• 分类号: Q782
• 字数: 4702字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.03.004

摘要

目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段(SN5α、SN5β)的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测.