水牛MD-2cDNA基因的克隆与原核表达

• 作者: 匡文华 张冬琳 张晓茹 成鹰 杜丽 焦寒伟 王凤阳 郝永昌 雷明
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 水牛 MD-2 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 9-13
• 分类号: Q785
• 字数: 2302字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2011.09.003

摘要

为探讨水牛抵抗革兰阴性菌感染的免疫机制,克隆、表达了水牛髓样分化蛋白-2(bMD-2)基因,并用Western blot进行鉴定.采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bMD-2基因,构建pET28a-bMD-2表达载体,转化至大肠埃希菌BL21( DE3)中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果显示,bMD-2基因含有一个483 bp的开放阅读框,编码161个氨基酸；37℃条件下,经1 mmol/LIPTG诱导表达6h后,His-bMD-2在E.coli BL21中表达量最高,并以包涵体的形式存在,融合蛋白的分子质量约为25 ku.结果表明水牛MD-2原核表达载体成功构建并表达,为继续深入对水牛MD-2基因功能的研究提供参考.