pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析

• 作者: 李扬秋 李萡 杨力建 沈琦 郑海涛 陈少华 陈思 黄欣
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,BCL11B 真核表达载体 K293细胞 Raji细胞
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 944-950
• 分类号: R733.73
• 字数: 5301字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.05.021

摘要

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt 淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况.方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照.通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率.通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况.高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达.结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%.实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05).活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖.结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础.