含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体的制备与表达分析

• 作者: 吴小兵 周为民 王秀平 管洁 谭文杰 邓瑶
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 分泌型萤光素酶 双报告基因 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 199-202
• 分类号: Q78
• 字数: 3241字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.02.012

摘要

目的:制备含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体,为慢病毒载体的进一步广泛应用奠定基础.方法:克隆构建含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的转基因载体pCS-gluc-2A-eGFP,酶切与序列分析鉴定其正确后,与包装质粒pCMVHR'△8.2、包膜质粒pVSV-G共转染293FT细胞,获得含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体;重组幔病毒载体感染A549、Huh7细胞后,用荧光显微镜直接观察报告基因GFP的表达,或取细胞上清实时检测分泌型萤光素酶的表达.结果:制备了含双报告基因的重组慢病毒载体,感染细胞后可以活体观察绿色荧光蛋白的表达,也可以快速灵敏地检测到分泌型萤光素酶的表达.结论:所获含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体感染效率高,表达易于活体实时检测,灵敏度高.本研究为慢病毒载体的广泛应用奠定了基础.