TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用

• 作者: 廖秀云 徐海聂 沙才华 王振全 罗宝正 薄清如 陈伟生
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 荧光PCR 检测
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏·质量安全
• 页码范围: 1367-1370
• 分类号: S855.1
• 字数: 2514字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.06.036

摘要

为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针；并对副猪嗜血杆菌标准菌株提取DNA后进行PCR扩增,将产物测序鉴定后克隆到pMD1s-T载体,再转化到大肠杆菌感受态细胞,细菌培养后对菌液进行PCR扩增,把产物测序鉴定后获得的重组质粒作为标准阳性对照；最后将建立的TaqMan探针荧光PCR方法进行灵敏度、特异性、稳定性试验.结果显示,该检测方法可以达到1μl1.0×101拷贝数量级的灵敏度；另外,该方法可以将HPS和大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌分开,特异性良好；稳定性试验显示,2次批内变异系数分别为0.65％和0.92％,批间变异系数为1.31％,稳定性良好.对口岸送检的56份猪肉和12份血浆蛋白粉样品进行检测,结果表明TaqMan探针荧光PCR方法和细菌分离方法的检测效果一致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王振全	吉林大学农学部畜牧兽医学院	10	6	1.0	2.0
2	薄清如	珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室	25	149	7.0	10.0
3	沙才华	珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室	17	41	4.0	5.0
4	廖秀云	珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室	17	61	5.0	7.0
5	徐海聂	珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室	17	92	6.0	8.0
6	罗宝正	珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室	15	45	5.0	6.0