重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中的表达及其细胞毒性

• 作者: 何晶龙 彭超 李岩松 郭德军
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 免疫毒素类 IL6(T22)-PE38 原核细胞 基因表达 细胞毒性
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 14-19,29
• 分类号: Q511|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 在大肠杆菌中表达、纯化重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38,并检测其细胞毒性.方法 以 PHis-hIL6(T22)-PE38质粒为模板,PCR扩增hIL6(T22)-PE38基因,插入表达载体pET-28a(+)的Neo Ⅰ和Xho Ⅰ多克隆位点,构建重组表达质粒,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)、Rosetmblue(DE3)和BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化.表达产物经亲和层析纯化后,检测其细胞毒性.结果 重组表达质粒pET-28a-hIL6(T22)-PE38经双酶切和测序证明构建正确.表达的重组毒素相对分子质量约56 000,在大肠杆菌Rosettablue(DE3)中表达量最高.最适诱导表达条件为:1 mmol/L IPTG 28℃诱导4 h.重组毒素能选择性地杀伤人骨髓瘤细胞U266和鼠骨髓瘤细胞SP2/0,体外对U266和SP2/0细胞的IC50分别为0.5～1.O和1.0～1.5.g/mi.结论 重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中成功获得可溶性表达,纯化的蛋白可明显选择性杀伤U266和SP2/0细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭德军	黑龙江八一农垦大学食品学院	52	289	10.0	13.0
3	何晶龙	黑龙江八一农垦大学食品学院	5	26	4.0	5.0
4	彭超	黑龙江八一农垦大学食品学院	4	19	3.0	4.0
5	李岩松	吉林大学人兽共患病研究所	28	215	8.0	14.0