大鼠Atohl真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究

• 作者: 侯瑾 朱珠 祝康 许珉 郑国玺 韦俊荣
• 来源期刊: 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 听觉丧失,感音神经性 Atohl 基因克隆 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2011,（16）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 751-755
• 分类号: R764.43
• 字数: 3942字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1781.2011.16.010

摘要

目的:利用基因工程方法克隆SD大鼠Atohl基因编码区序列,构建Atohl的真核表达载体pA-tohl-IRES2-EGFP,并验证其在293T细胞中的表达.方法:通过RT-PCR从SD大鼠结肠组织内扩增出Atohl基因全长CDS序列,并TA克隆于PMD-19T载体中.纯化回收的目的片段测序后连接于真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,构建pAtohl-IRES2-EGFP真核表达载体.再次测序后脂质体介导重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.结果:测序后将扩增得到的大鼠Atohl CDS序列与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性,突变为无义突变,不影响蛋白表达.双酶切和测序结果证明Atohl已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒转染293T细胞24 h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达.结论:获得正确Atohl编码序列,真核表达载体pAtohl-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达,为进一步对感音神经性聋的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑国玺		55	265	9.0	14.0
2	祝康		36	69	5.0	6.0
3	韦俊荣		32	90	6.0	7.0
4	许珉		98	437	11.0	18.0
5	侯瑾		45	138	7.0	9.0
6	朱珠		5	1	1.0	1.0