创伤弧菌溶血素蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 张云 张在文 郭建巍 钱扬会 马骢 魏杰
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 创伤弧菌 溶血素蛋白质类 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 543-546
• 分类号: R378.3|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建创伤弧菌溶血素(Vibrio vulnificus cytolysin,VVC)基因原核表达质粒,表达并纯化重组蛋白.方法 从创伤弧菌基因组DNA中钓取VVC基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组蛋白用镍离子金属螯合柱纯化,采用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a(+)-VVC经双酶切及测序证明,VVC基因长度为1 371 bp,与GenBank中登录的VVC基因序列同源性为99%;表达的融合蛋白相对分子质量约为71 000,主要以包涵体形式表达,表达量达菌体总蛋白的50%;纯化的重组蛋白纯度大于90%,可与创伤弧菌免疫的小鼠血清特异性结合.结论 已在大肠杆菌中高效表达了VVC蛋白,并进行了纯化,为创伤弧菌诊断试剂盒的研制提供了材料,也为进一步深入研究其结构功能域、生物学活性及创伤弧菌的致病机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭建巍	海军总医院检验科	56	244	9.0	12.0
2	马骢	海军总医院检验科	98	534	12.0	17.0
3	钱扬会	海军总医院检验科	27	101	6.0	8.0
4	张云	海军总医院检验科	19	85	5.0	8.0
5	张在文	海军总医院医务部	42	195	9.0	12.0
6	魏杰	海军总医院检验科	1	0	0.0	0.0