人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化

• 作者: 任哲 刘忠 卢嘉欣 张嘉萱 彭鑫磊 王绍祥 王蕊 赵振岭 陈伟 韩波
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: TRAP1 Hsp75 克隆 原核表达 优化 pET-28a(+) BL21
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 161-166
• 分类号: Q785
• 字数: 5566字
• 语种: 中文

摘要

应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白l(tumor necrosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA.选择Nde I和Xho I分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上.重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序.测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆茵BL21 (DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1.通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高.结果表明,在39℃条件下,0D600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6h,目的蛋白的表达量最高.该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础.