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摘要:
目的 构建含幽门螺杆菌(Hp)Lpp20基因的真核表达重组体,并鉴定其在Hela细胞中能否有效表达,为进一步开展Lpp20核酸疫苗与该蛋白的生物学功能的研究打下基础. 方法 抽提Hp标准菌株26695基因组DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)技术从基因组DNA扩增Lpp20基因,经过一系列酶切、连接反应将其克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+),转人大肠杆菌,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应鉴定;用脂质体法将构建好的重组载体pcDNA3.1(+)- Lpp20转染Hela细胞,通过免疫细胞化学法及Western印迹法检测其在Hela细胞中表达的Lpp20蛋白. 结果 成功扩增出长约528bp的Lpp20基因,测序结果表明扩增出的Lpp20基因与HpLpp20序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实Lpp20基因正确克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+),并经免疫细胞化学法和Western印迹法检测到重组体可在Hela细胞中有效表达. 结论 成功构建了Lpp20基因的Hp真核表达重组体,并检测到其在Hela细胞中可表达出免疫反应性良好的蛋白,为进一步探索其免疫作用及生物学功能奠定了基础.
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文献信息
篇名 幽门螺杆菌Lpp20真核表达重组体的构建及其表达鉴定
来源期刊 实用预防医学 学科 医学
关键词 幽门螺杆菌 真核表达重组体 Lpp20
年,卷(期) 2011,(9) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 1619-1622
页数 分类号 R379.9
字数 3883字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1006-3110.2011.09.007
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真核表达重组体
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实用预防医学
月刊
1006-3110
43-1223/R
大16开
长沙市芙蓉中路一段450号
42-192
1994
chi
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