携带人肝细胞生长因子腺病毒重组体的构建

• 作者: 周育森 孙自敏 张祥忠 朱小玉 朱薇波 陈嘉瑜 陈运贤
• 来源期刊: 中华临床医师杂志(电子版)
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞生长因子 绿色荧光蛋白质类 腺病毒,人 基因疗法
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1906-1911
• 分类号: R575
• 字数: 4336字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2011.07.076

摘要

目的 构建一种同时携带人肝细胞生长因子(hHGF)及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒重组体,为hHGF的基因治疗提供实验基础.方法 对重组质粒pcDNA3-hHGF进行酶切鉴定及测序正确后,酶切获得hHGF,亚克隆至带有GFP 标记的穿梭质粒pAdTrack-CMV上.选取hHGF 正向插入的重组穿梭质粒经PmeⅠ充分线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1 在大肠杆菌BJ5183 中同源重组,挑取阳性克隆行PCR 及酶切鉴定.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,脂质体转染HEK293 细胞进行包装并扩增获取重组病毒上清,RT-PCR 及Western Blot 方法检测hHGF 的表达.结果 目的基因的测序结果与Genebank上的hHGF序列一致.hHGF 基因插入重组腺病毒载体的预期位置,感染Ad-hHGF的HEK293细胞中可检测到hHGF mRNA 和蛋白的表达.结论 成功构建了同时携带hHGF和GFP的重组腺病毒表达载体Ad-hHGF,为进一步探讨hHGF 的生物学功能提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张祥忠	中山大学附属第一医院血液内科	42	237	7.0	14.0
2	孙自敏	安徽医科大学附属省立医院血液内科	88	329	11.0	12.0
3	周育森	军事医学科学院微生物流行病研究所病原分子生物学研究室	75	354	8.0	16.0
4	陈运贤	中山大学附属第一医院血液内科	103	836	15.0	24.0
5	朱薇波	安徽医科大学附属省立医院血液内科	21	104	5.0	10.0
6	朱小玉	安徽医科大学附属省立医院血液内科	18	123	5.0	11.0
7	陈嘉瑜	广州市第十二人民医院内科	2	0	0.0	0.0