重组蛋白A在大肠杆菌中的分泌表达及活性测定

• 作者: 刘彬 刘景晶 刘素丽 张秀华 曹荣月 范豪 邢芸
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组蛋白A 大肠杆菌 分泌表达 酶联免疫反应
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 分类号: Q51
• 语种: 中文

摘要

利用大肠杆菌表达系统表达金黄色葡萄球菌蛋白A,根据大肠杆菌密码子偏好性对金黄色葡萄球菌蛋白A的基因序列进行密码子优化,在N端加入L-门冬酰胺酶( L-AsPsII)信号肽简并基因序列使其分泌表达,将全合成的蛋白A基因片段插入到pET-28a载体中,转化人BL21( DE3).乳糖诱导使其表达,其中80％以上目的蛋白位于胞外,表达量达到375 mg/L,剩余目的蛋白位于周质.将胞外目的蛋白超滤浓缩,通过DEAE阴离子交换剂,一步纯化后得到的蛋白,在SDS-PAGE上显示为约32 k的单一条带,纯度达95％以上.利用酶联免疫吸附试验( ELISA)检测重组蛋白A活性较高,能与小鼠、兔及羊IgG抗体高效结合,且沸水煮10 min后仍能保持同IgG结合的活性.