酿酒酵母RAVE复合物的155kD亚基Rav1p的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化

• 作者: 张震宇 徐灿
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 酿酒酵母 RAVE复合物 Ravlp 克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 99-104
• 分类号: Q78
• 字数: 3833字
• 语种: 中文

摘要

以酿酒酵母基因组DNA为模板,根据CenBank上公布的酿酒酵母Ravlp基因(rav1)序列和表达裁体特性设计 特异性引物,PCR扩增得到4 074 bp的DNA片段,将PCR产物和原核表达栽体pET28a(+)同时进行双酶切；双酶切后的PCR产物和表达栽体进行连接,构建成重组质粒pET28a-ravl.再将pET28a-ravl转化到BL21( DE3)感受态细胞中.经IPTG 16℃低温诱导40h表达His-tag融合的Ravlp.诱导后的菌体进行超声波破碎,然后用GE healthcare公司的AKTA蛋白纯化仪和His Trap HP I mL亲和层析柱纯化目的蛋白.SDS-PAGE电泳分析和Western blot分析显示在155 kD有明显的条带,成功实现了Ravlp在大肠杆菌中的表达纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张震宇	江南大学生物工程学院江南大学工业生物技术教育部重点实验室	18	41	3.0	6.0
2	徐灿	江南大学生物工程学院江南大学工业生物技术教育部重点实验室	3	0	0.0	0.0