纳豆激酶基因的克隆和高效表达

• 作者: 倪敬田 唐欣昀 王伟 甘旭华 甘露 陈晓琳
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 纳豆激酶 枯草芽孢杆菌 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 556-559
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

为了克隆纳豆激酶(Nattokinase,NK)基因,实现纳豆激酶在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究,首先以从枯草芽孢杆菌中提取的基因组DNA为模板,通过PCR扩增包括信号肽、前导肽、成熟肽序列的前纳豆激酶原基因,将其克隆到载体pET28a中,构建重组质粒pET28a-NK,成功转化大肠杆菌BL21(DE3);然后优化影响该基因表达的温度、时间和IPTG添加量等因素.结果表明,重组菌株BL21(DE3)-NK在20℃下培养、IPTG添加量为0.4mmol·L-1、培养20h时表达产物的纤溶活性最大,可达到81.73 U·mL-1,SDS-PAGE检测观察到l条38 kDa的蛋白条带,与预期相符.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王伟	安徽农业大学生命科学学院	56	276	9.0	14.0
2	唐欣昀	安徽农业大学生命科学学院	80	887	16.0	24.0
3	陈晓琳	安徽农业大学生命科学学院	36	444	11.0	20.0
4	甘旭华	安徽农业大学生命科学学院	22	399	12.0	19.0
5	倪敬田	安徽农业大学生命科学学院	4	63	2.0	4.0
6	甘露	安徽农业大学生命科学学院	2	15	2.0	2.0