纳豆激酶基因的克隆表达以及活性分析

• 作者: 张国俊 张惠文 徐明恺 谭焕波
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 生物学
• 关键词: 纳豆激酶 克隆表达 活性分析 冷冻干燥
• 年，卷（期）: 2012,（18）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 195-198
• 分类号: Q786
• 字数: 4616字
• 语种: 中文

摘要

应用PCR的方法从分泌纳豆激酶的枯草杆菌基因组DNA中扩增得到全长为1056bp的前导肽＋成熟肽纳豆激酶原基因（pro-NK）,并构建了纳豆激酶的重组表达载体pET-28a-pro-NK;转化E.coliBL21（DE3）后,在IPTG的诱导下实现了纳豆激酶的高效表达,经SDS-PAGE显示在28ku处有一特异带;表达产物经Ni^2＋亲和层析纯化后,纤维平板法测得的纳豆激酶的比活力为34245.1IU/mg;纯蛋白经透析和冷冻干燥处理后,纳豆激酶的比活力为16271.5IU/mg;在此基础上,对冻干保护剂的添加进行优化,最佳保护效果为甘露醇与纳豆激酶质量比为1：2,可比不加保护剂时比活力提高了30.9%。这可为基因工程方法生产纳豆激酶纯品,稳定其活性便于贮运,并将其开发成为临床药物提供技术参考。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张惠文	中国科学院沈阳应用生态研究所	63	1420	20.0	36.0
2	徐明恺	中国科学院沈阳应用生态研究所	21	94	5.0	8.0