纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定

• 作者: 余榕捷 孙奋勇 汪炬 洪岸 谢秋玲
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 纳豆激酶 溶源性 基因表达
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 757-761
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3411字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.06.010

摘要

目的:利用基因工程技术,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌.方法:利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原(pro-NK)基因,并克隆到表达载体pET3c上,构建表达pro-NK和载体上22氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK;表达质粒pENK分别转化溶源化宿主菌BL21(DE3)pLysS-和BL21(DE3)pLysS+,获得表达菌pENK-(DE3)pLysS-和pENK-(DE3)pLysS+.利用SDS-PAGE和纤维蛋白平板法检测目的蛋白的表达及活性.结果:SDS-PAGE显示两株菌株均表达42 kD的目的蛋白.纤维蛋白平板法显示表达产物具溶栓的活性.在pENK-(DE3)pLysS-中融合蛋白不需异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导就有基础表达,融合蛋白的表达使表达菌细胞溶解,菌落中空,表明表达产物具细胞毒作用.结论:本研究成功实现了在大肠杆菌表达具有溶栓活性的pro-NK融合蛋白,为开发纳豆激酶成为新一代溶栓药物的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	洪岸	暨南大学生物工程研究所	107	856	14.0	25.0
2	孙奋勇	暨南大学生物工程研究所	67	545	11.0	20.0
3	谢秋玲	暨南大学生物工程研究所	60	665	13.0	24.0
4	汪炬	暨南大学生物工程研究所	39	289	11.0	16.0
5	余榕捷	暨南大学生物工程研究所	37	174	6.0	12.0