小鼠FasL基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

• 作者: 何善阳 何霞 关琳琳 冯发深 徐霖 曹开源 汪杨 潘金成 王铸 罗燕芬
• 来源期刊: 解剖学研究
• 学科: 医学
• 关键词: Fas Ligand 基因转染 稳定表达 HEK293细胞
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 180-184
• 分类号: R322-33
• 字数: 3423字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-0770.2012.03.005

摘要

目的 构建含有小鼠Fas Ligand (FasL)基因的重组真核表达载体,并检测FasL蛋白在其稳定转染的HEK293细胞中的表达情况,为构建表达小鼠Fas L的树突状细胞(DC)模型,深入研究DC联合T细胞防治移植物抗宿主病(GVHD)的新方法奠定基础.方法 从小鼠脾脏中提取RNA并逆转录为cDNA,以该cDNA为模板扩增FasL基因,插入pcDNA3.1(+)载体中构建pcDNA3.1(+)-FasL重组质粒,利用脂质体将其转染HEK293细胞,用G418筛选稳定表达细胞系,Western blot确定重组蛋白的表达.结果 通过酶切及测序证实FasL序列正确插入表达载体pcDNA3.1(+),Westemblot检测证实转染重组质粒的细胞能正确表达FasL蛋白,G418筛选后能够得到稳定表达FasL的抗性细胞株即FasL-HEK293.结论 重组质粒pcDNA3.1(+)-FasL和稳定表达FasL的HEK 293细胞成功构建,为后续FasL-DC细胞的研究打下了坚实基础.