真核表达载体pIRES2-EGFP-SP-B-C/T 1580的构建及其在293T细胞中的表达

• 作者: 刘伟 常立文 徐洪涛 李文斌 杨慧 王席娟 蔡保欢 袁文浩 赵玲霞
• 来源期刊: 中国医师杂志
• 关键词: 支气管肺发育不良/遗传学 基因表达 遗传载体 肺表面活性物质相关蛋白质B/遗传学
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1338-1341
• 页数: 4页
• 字数: 3935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2012.10.013

摘要

目的 构建两种人肺表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)基因变异型的真核表达载体,研究SP-B基因多态性与支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的关系.方法 应用基因重组技术,构建pIRES2-EGFP-SP-B-C 1580和pIRES2-EGFP-SP-B-T 1580真核表达质粒,经测序鉴定后,采用脂质体法转染293T细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在293T细胞中的表达,逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(reverse transcription-polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,RT-PCR-RFLP)检测SP-B-C/T 1580 mRNA的表达,Westem blot 检测SP-B蛋白的表达.结果 两个重组质粒含有完整SP-B cDNA,在1580位点碱基序列分别为C和T,转染293T细胞后有相应的mRNA及蛋白表达.结论 成功构建了真核表达载体pIRES2-EG-FP-SP-B-C/T 1580,为揭示支气管肺发育不良的发生机制奠定基础.