角蛋白酶产生菌的分离鉴定及其kerC的克隆表达

• 作者: 侯晟琦 吴琦 王丽华 赖欣 陈惠 韩学易
• 来源期刊: 中国环境科学
• 学科: 地球科学
• 关键词: 角蛋白酶 枯草芽孢杆菌B-3 基因克隆 kerC基因 原核表达 His-Tag
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 页码范围: 1845-1852
• 分类号: X172|Q89
• 字数: 5974字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6923.2012.10.018

摘要

以四川农业大学养鸡场堆砌废弃羽毛处土壤为样品,筛选出一株具有较强降解羽毛能力的细菌B-3菌株.经形态学、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析,鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为枯草芽孢杆菌B-3.并成功克隆到该菌株的角蛋白酶基因kerC(GenBank No.:JN021789),在大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)中获得了高效表达.该基因全长1146bp,GC含量46.5％,编码381个氨基酸,与已报道的枯草芽孢杆菌YYW-1的kerC基因(GenBank No.:EU362730)同源性达到100％.重组菌株经IPTG诱导后角蛋白酶酶活力达14.8U/mL,经His-Tag纯化和SDS-PAGE分析表明,重组角蛋白酶分子量约为60kDa(融合了硫氧还蛋白,Trx).重组角蛋白酶最适反应温度和pH值分别为65℃与7.0.