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人己糖胺酶D的原核表达、纯化及酶学特性研究
人己糖胺酶D的原核表达、纯化及酶学特性研究
作者:
刘琳
徐龚
李静
蔡春梅
蔡玉梅
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
已糖苷酶D
表达
纯化
酶学特性
摘要:
糖基化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,参与生物体中的信号传导、细胞识别等多种细胞活动,糖基缀合物的正常水解是生物体代谢的必需途径.人己糖胺酶D( Hexosaminidase D)是新发现的一种存在于人细胞质中的切除GalNAc糖基化修饰的外切酶,但该酶的酶学特性尚不清楚.利用PCR的方法,将Hex D的cDNA序列构建到质粒pET3C中,重组质粒转化大肠杆菌BL21( DE3) plysS后,通过优化异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度(0.1mmol/L)和诱导时间(10 h)获得了高可溶性表达的重组蛋白酶.采用Ni-NTA亲和层析对重组蛋白进行了纯化,SDS-PAGE检测分子量的大小(58 kDa)和纯度(95%以上).以4-甲基伞形酮-2-乙酰氨基-2-脱氧半乳糖(4-MU-O-GalNAc)为荧光底物,测定该酶的最适反应pH值为5.5,最适反应温度为37℃,且该酶的热稳定性较好,在50℃下放置半小时仍有较高活性,1mmol/L的金属离子(CuSO4、FeSO4·7H2O、MgCl2· 6H2O、CaCl2、NiSO4·6H2O、AlCl3·6H2O、ZnSO4·7H2O、MnCl2)及EDTA对该酶活性影响不大,10mmol/L AlCl3、CuSO、FeSO4·7H2O对该酶有不同程度的抑制.在最适条件下(pH 5.5,37℃)下,该酶的Km为0.16mmoL/L,最大反应速率为3.06 μmol/( min·mg).
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文献信息
篇名
人己糖胺酶D的原核表达、纯化及酶学特性研究
来源期刊
中国生物工程杂志
学科
生物学
关键词
已糖苷酶D
表达
纯化
酶学特性
年,卷(期)
2012,(9)
所属期刊栏目
研究报告
研究方向
页码范围
28-33
页数
分类号
Q786
字数
语种
中文
DOI
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作者信息
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姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
蔡玉梅
山东农业大学动物科技学院
35
231
10.0
14.0
2
李静
南开大学药学院药物化学生物学国家重点实验室天津市分子药物研究重点实验室
61
310
10.0
14.0
3
蔡春梅
5
7
1.0
2.0
4
刘琳
山东农业大学动物科技学院
21
98
5.0
9.0
5
徐龚
南开大学药学院药物化学生物学国家重点实验室天津市分子药物研究重点实验室
1
1
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已糖苷酶D
表达
纯化
酶学特性
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国生物工程杂志
主办单位:
中国科学院文献情报中心
中国生物技术发展中心
中国生物工程学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1671-8135
CN:
11-4816/Q
开本:
大16开
出版地:
北京中关村北四环西路33号
邮发代号:
82-13
创刊时间:
1976
语种:
chi
出版文献量(篇)
4896
总下载数(次)
30
总被引数(次)
45351
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