芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核可溶性表达优化及包涵体复性研究

• 作者: 冯舵 姚斌 李中媛 李倩倩 杨培龙 韩翠晓 高伟 黄火清
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: β-折叠桶植酸酶PhyHT 分子伴侣 可溶性表达 包涵体 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 49-55
• 分类号: Q819
• 语种: 中文

摘要

目的:来源于芽孢杆菌的β-折叠桶植酸酶基因PhyH,截去N端120个碱基编码的40个氨基酸后,成功构建了原核表达体系,通过两种方法分别得到有活性的目的蛋白PhyHT,并通过进一步纯化提高目的蛋白的纯度.方法:通过分子伴侣共表达系统提高目的蛋白的可溶性表达,并通过包涵体复性研究,从包涵体中制备出有活性的目的蛋白.结果:(1)目的蛋白PhyHT主要以包涵体形式存在于沉淀中；(2)通过优化表达条件,降低温度和诱导剂浓度均不能明显改善包涵体问题,通过构建分子伴侣共表达系统(即pG-KJE8、pGro7、pKJE7和pTfl6 4种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET28b-PhyHT共表达),筛选能提高目的蛋白可溶性表达的分子伴侣质粒；(3)包涵体经过复性和进一步的纯化,得到了高纯度的有生物活性的目的蛋白.