大肠杆菌重组几丁质酶的表达、包涵体复性及酶学性质研究

• 作者: 吕梦圆 吕永玲 夏祥 林建国 王常高 胡瑛 蔡俊
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 几丁质酶 重组蛋白 包涵体 复性
• 年，卷（期）: 2015,（22）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 168-172,178
• 分类号: TS201.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2015.22.027

摘要

通过研究重组几丁质酶在大肠杆菌表达系统中诱导表达的浓度、时间和温度,获得表达的最佳条件.表达产物除了可溶性目的蛋白以外,仍存在于包涵体中.采用透析复性和Ni-NTA亲和层析柱上复性两种方法对包涵体中的目的蛋白进行复性,并比较对目的蛋白产率和比酶活的影响.并考察了亲和层析柱上复性时的上样量、洗脱速率和温度对酶活的影响.结果发现,表达的几丁质酶可以采用透析和亲和层析柱上复性,亲和层析柱上复性的比酶活为1347.7 U/mg,明显高于透析复性,但产率明显低于透析复性.对1 mL的Ni-NTA亲和层析柱,较低浓度的蛋白复性液在0.4 mL·min-1洗脱速率下,降低上样量和温度,可以提高复性效率.复性后的几丁质酶对荧光底物具有较高活性,反应的最适温度为37 ℃,最适pH为3.8.