类芽孢杆菌属β-葡萄糖苷酶在大肠杆菌中可溶性重组表达的优化

• 作者: 包怡红 商永梅
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: β-葡萄糖苷酶 类芽孢杆菌属 大肠杆菌 可溶性表达 表达载体
• 年，卷（期）: 2014,（23）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 186-190
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2014.23.030

摘要

目的:β-葡萄糖苷酶在食品工业领域具有广泛的应用价值,但重组表达时容易形成无活性的包涵体.通过传统诱导条件优化无法完全解决包涵体积累问题,需探索新的策略.方法:从类芽孢杆菌属(Paenibacillus sp)基因组中克隆获得了β-葡萄糖苷酶基因bgl,构建到大肠杆菌表达载体pET28a获得重组质粒pET-bgl,转化大肠杆菌宿主细胞BL21(DE3)获得重组菌BL-ETbgl,并进行诱导条件优化.进一步通过复制起始位点替换,构建了新型大肠杆菌表达载体pACYT-bgl,转化大肠杆菌宿主细胞BL21(DE3)后得到改进型重组菌BL-ATbgl.结果:BL-ETbgl经诱导表达后,所表达重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶活性.经诱导条件优化后,仍有40％蛋白以包涵体存在.而BL-ATbgl经诱导表达后,可溶性的重组β-葡萄糖苷酶约占80％.自诱导培养基中β-葡萄糖苷酶产量可达2.31×106U/L.结论:通过降低质粒拷贝数、优化培养条件等手段,可以大幅度提高类芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶在大肠杆菌中的可溶性表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	包怡红	东北林业大学林学院	154	1242	19.0	23.0
2	商永梅		6	5	1.0	2.0