人接头蛋白NRBP的表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 林政 王晖 胡雪峰
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: NRBP 接头蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 16-20
• 分类号: Q786|R392.11
• 字数: 4400字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2012.02.032

摘要

目的:制备接头蛋白NRBP的兔多克隆抗体,并检测该抗体的效价及特异性.方法:PCR方法以重组质粒PEF-NRBP为模板,获得NRBP全长及NRBP(1 -99Aa)cDNA,构建到原核表达质粒pET -21a及pGEX - 6P -1中.分别转入大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导表达后,纯化并鉴定表达产物将其免疫家兔,间接ELISA法及免疫印迹等方法鉴定抗体.结果:成功获得人NRBP的cDNA,构建得到相关的原核表达质粒,在大肠杆菌中可诱导性高表达,纯化后蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经ELISA检测为阳性结果,4只免疫家兔的抗体效价约为1∶5200～1∶40000.Western印迹结果显示,该抗体可特异性的识别真核细胞外源性及内源性约60kDa的NRBP蛋白,并且具有较强免疫沉淀能力.结论:NRBP多克隆抗体具有很好的特异性和敏感性,该抗体的成功制备为进一步研究NRBP的功能提供了重要工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡雪峰	福建师范大学生命科学学院	46	39	3.0	4.0
2	林政	福建师范大学生命科学学院	2	4	1.0	2.0
3	王晖	福建师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0