短枝型苹果MdRGL基因的克隆及原核表达分析

• 作者: 冯守千 刘美艳 刘金 宋杨 张艳敏 王传增 王延玲 陈学森
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 短枝型苹果 DELLA蛋白 基因克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 1347-1354
• 分类号: S661.105
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.07.012

摘要

[目的]克隆短枝型苹果(Malus domestica Borkh.)的MdRGL基因,并对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为明确短枝型苹果MdRGL基因与短枝芽变特性之间的关系奠定基础.[方法]采用同源克隆法,以短枝型苹果叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得短枝型苹果MdRGL的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定.将克隆到的短枝型苹果MdRGL克隆到表达载体pGEX-4T-1上,构建融合表达载体pGEX-4T-MdRGL,转化到大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达.[结果]从短枝型苹果中克隆到5条MdRGL基因:MdRGL1a/b、MdRGL2a/b和MdRGL3b.序列分析表明,除MdRGL3b外,另外4条序列都具有DELLA和VHYNP结构域.利用所构建的原核表达载体,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白与预期蛋白大小一致.[结论]短枝型苹果中DELLA蛋白的克隆和原核表达的成功,为进一步纯化和鉴定目的蛋白及研究其功能奠定了试验基础.