结核分枝杆菌16-kDa α晶体蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 刘大斌 安小平 张博 张文慧 李存 李建彬 王晓娜 童贻刚 米志强 范华昊
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 结核分枝杆菌 α晶体蛋白 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 515-518
• 分类号: Q78
• 字数: 3412字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.04.011

摘要

目的:利用基因工程技术原核表达并纯化结核分枝杆菌α晶体蛋白(Acr).方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增Acr的编码基因,以pCold为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析和纯化该表达产物.结果:构建了具有正确基因序列的Acr重组表达质粒,重组Acr在大肠杆菌BL21(DE3)中经低温诱导得到可溶性表达；分别用6×His的单克隆抗体和16-kDa单克隆抗体对表达产物进行Western印迹分析,结果显示在相对分子质量约19000处均有特异性条带,与预计大小吻合；纯化后蛋白纯度达90％,浓度达0.8 mg/mL.结论:表达了重组可溶性Acr,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础.