致倦库蚊防御素基因的克隆与原核表达及蛋白纯化

• 作者: 张春林 王吉平 王赟 翟素珍
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 致倦库蚊 防御素基因 克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4|R384.1
• 字数: 5168字
• 语种: 中文

摘要

以冈比亚按蚊防御素(Defensin)氨基酸序列为种子序列,在致倦库蚊EST库中查找相似序列.通过RT-PCR技术,克隆获得致倦库蚊防御素编码序列.将致倦库蚊防御素成熟肽基因片段定向克隆至原核表达载体pET32a(+),构建致倦库蚊防御素重组表达质粒pET32a-DEF,导入大肠埃希菌Rosetta中表达,并比较不同IPTG浓度、不同诱导时间、不同诱导温度对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件,重组蛋白经His-镍蛋白纯化柱纯化.结果表明,致倦库蚊防御素基因编码区全长300 bp,编码99个氨基酸.pET32a-DEF最佳诱导表达条件为,IPTG浓度0.2 mmol/L,诱导时间为4h,诱导温度为37℃,经纯化获得大小约29 ku的重组蛋白,这为进一步研究该蛋白功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张春林	贵阳医学院生物学教研室	67	135	6.0	7.0
2	王赟	贵阳医学院医学生物技术教研室	14	72	6.0	7.0
3	翟素珍	贵阳医学院生物学教研室	2	9	1.0	2.0
4	王吉平	贵阳医学院生物学教研室	1	1	1.0	1.0