小反刍兽疫病毒F蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 李刚 田康乐 程朝飞 邱文英
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 F蛋白 原核细胞 基因表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 诊断制剂
• 页码范围: 1185-1189
• 分类号: S852.65+9.5|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)F蛋白,并制备多克隆抗体.方法 根据GenBank中登录的PPRV Nigeria 75/1株F基因全长序列,采用DNAStar软件设计去除F基因信号肽和跨膜区的引物,进行RT-PCR扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达.表达的重组蛋白纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,并初步应用于PPRV的检测.结果 重组原核表达质粒pET-32a(+)-PPRV-F经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组F蛋白相对分子质量约59 000,诱导6h表达量最高,且主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95％以上;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应,抗体效价高于1:64000;间接免疫荧光试验显示,制备的多抗能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原.结论 原核表达了PPRVF蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为其进一步研究及小反刍兽疫临床快速检测方法的建立奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李刚	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养国家重点实验室	111	742	14.0	23.0
2	邱文英	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养国家重点实验室	7	58	5.0	7.0
3	田康乐	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养国家重点实验室	3	36	3.0	3.0
4	程朝飞	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养国家重点实验室	4	11	2.0	3.0