拟南芥甘露糖苷酶Ⅰ和人 N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ的原核表达及其多克隆抗体制备

• 作者: 何建勇 刘波 吴军 唱韶红 巩新 胡晓
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 甘露糖苷酶Ⅰ N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 页码范围: 817-820
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3187字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.06.011

摘要

目的:在大肠杆菌中分别重组表达拟南芥甘露糖苷酶Ⅰ(ATMDSI)和人 N-乙酰葡萄糖胺转移酶 I(HsGnTI),制备其多克隆抗体,为基因表达鉴定提供检测抗体.方法:用 PCR 方法克隆 ATMDSI、HsGnTI 基因片段,连接至pBV220表达载体后转化大肠杆菌 DH5α,获得表达菌株,通过42℃升温诱导表达,制备纯化 ATMDSI 和 HsGnTI;纯化的蛋白以80μg/kg 的剂量免疫大耳白兔,经3次免疫后,采集血清制备其相应的多克隆抗体;采用 Western 印迹检测多克隆抗体的特异性.结果:获得 ATMDSI 和 HsGnTI 基因片段,并构建了其相应的原核表达载体 pBV220-ATMDSI、pBV220-HsGnTI,在大肠杆菌中表达了重组 ATMDSI 和 HsGnTI,SDS-PAGE 分析显示其相对分子质量分别为45.3×103和46.9×103,与理论值一致;用纯化的蛋白免疫大耳白兔后制备了抗 ATMDSI、HsGnTI 多克隆抗体,Western 印迹结果证明该抗体具有较高的特异性.结论:获得了特异性较高的抗 ATMDSI、HsGnTI 多克隆抗体血清,为甘露糖苷酶Ⅰ和 N-乙酰葡萄糖胺转移酶Ⅰ的研究提供了检测抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何建勇	沈阳药科大学生命科学与生物制药学院	55	294	10.0	14.0
2	刘波	军事医学科学院生物工程研究所	32	100	6.0	9.0
3	吴军	军事医学科学院生物工程研究所	55	227	8.0	13.0
4	巩新	军事医学科学院生物工程研究所	33	121	6.0	10.0
5	唱韶红	军事医学科学院生物工程研究所	34	141	6.0	11.0
6	胡晓	军事医学科学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0