重组原核表达载体pGEX-4T-1-eIF5A的构建及表达

• 作者: 徐云升 徐祥 李向云 王晓慧 邱伟 黄宏
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 真核起始因子5A 质粒 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 983-986
• 分类号: R751|Q78
• 字数: 2823字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人eIF5A基因的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pGEX-4T-1-eIF5A融合蛋白.方法 以pCMV6-XL4-eIF5A作为模板,经PCR技术扩增目的片段,将获得的目的片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,经酶切鉴定、DNA测序检测插入序列的正确性.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A转化到E.coli BL21内,经IPTG诱导后,GST pull-down后SDS-PAGE电泳分析以及Westernblot检测人eIF5A的表达.结果 成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,GST pull-down后电泳分析以及Western blot结果说明大肠杆菌BL21诱导后表达出人eIF5A的glutathione S-transferase (GST)融合蛋白.功能研究初步证明重组eIF5A在细胞增殖过程中发挥重要作用.结论 构建成功的重组原核表达载体能在E.coli BL21内表达eIF5A的GST融合蛋白,为进一步研究人eIF5A蛋白的结构和生理功能如促进创伤修复提供帮助.