靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白的原核表达、纯化及其体外活性

• 作者: 刘革力 张路瑜 蒋攀 郑毅 陈全
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤靶向性 血管内皮生长因子类 α-半乳糖 重组融合蛋白质类 抗肿瘤活性
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 治疗性制剂
• 页码范围: 56-60
• 分类号: R73-36+2|Q7
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达、纯化靶向性抗肿瘤VEGF-α-Gal融合蛋白,并检测其体外靶向性和抗肿瘤效应.方法 从人肺腺癌A549细胞中扩增VEGF-α-Gal融合基因,插入pQE30载体,构建重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal,转化至大肠杆菌M15中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组融合蛋白的表达量及表达形式,Western blot分析重组蛋白的反应原性.经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,包涵体复性后,通过体外细胞黏附试验评价其VEGFR靶向性,血清杀伤试验分析其α-Gal模拟表位的体外抗肿瘤活性.结果 重组表达质粒pQE30-VEGF-α-Gal经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组融合蛋白相对分子质量约为18000,诱导5h表达量最高,约占菌体总蛋白的15％,主要以包涵体形式表达；重组融合蛋白可分别与抗VEGF、抗α-Gal抗体特异性结合；纯化的重组蛋白纯度约为90％,可黏附VEGFR+的A549细胞,且其α-Gal模拟表位在人新鲜血清的参与下,对A549细胞产生了明显的溶细胞效应.结论 成功表达并纯化了重组融合蛋白rVEGF-α-Gal,该蛋白不但具有VEGFR靶向性,还兼具α-Gal表位功能,为研发新型靶向肿瘤生物制剂奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈全	重庆医科大学基础医学院免疫学教研室	58	230	9.0	11.0
5	刘革力	重庆医科大学基础医学院免疫学教研室	36	57	4.0	6.0
9	郑毅	重庆医科大学基础医学院免疫学教研室	4	8	2.0	2.0
13	蒋攀	重庆医科大学基础医学院免疫学教研室	2	2	1.0	1.0