贝类奥尔森派琴虫可视化LAMP检测技术的建立与应用

• 作者: 刘加波 庞耀珊 彭宜 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 派琴虫 贝类 LAMP 荧光反应 检测
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕
• 页码范围: 302-305
• 分类号: S944.1
• 字数: 3049字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4829.2012.01.065

摘要

根据环介导等温扩增(LAMP)技术原理,针对奥尔森派琴虫(Perkinsus olseni)的5.8S核糖体RNA与内转录2间隔区序列,设计了6条特异性LAMP扩增引物,分别为两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP、两条环引物LF和LB.通过对反应条件的优化,建立了一种适用于贝类奥尔森派琴虫的可视化LAMP检测技术.该技术只对奥尔森派琴虫发生扩增反应,产生黄绿色荧光扩增产物,对其他对照DNA样品无扩增反应,不产生黄绿色荧光.对F3和B3外引物扩增产物进行测序分析,其序列与GenBank中奥尔森派琴虫序列一致,检测结果具有高度特异性.对奥尔森派琴虫质粒DNA的最低检测量为100 fg.用该项LAMP技术与OIE公布的派琴虫PCR检测技术分别对50份分别来自华东及华南沿海地区的牡蛎样品进行检测,同时对PCR阳性样品进行测序分析.结果LAMP检测到2份奥尔森派琴虫,PCR方法检测到9份派琴虫.测序分析结果表明,PCR方法检测到的9份派琴虫阳性样品中有2份为奥尔森派琴虫,其结果与LAMP检测结果相符,说明该技术适用于贝类样品奥尔森派琴虫的检测.