人树突状细胞SOCS1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 吕成伟 涂微 罗荣城 阮健
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人树突状细胞 信号传导通路抑制因子1 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 248-250,278
• 分类号: R392.4
• 语种: 中文

摘要

目的 构建大树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(SOCS1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法 根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度.然后转染hDCs,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR和Western blot检测干扰组、阴性对照组、空白对照组SOCS1的表达情况.结果 将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功.荧光实时定量PCR及Western blot检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后,与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA组mRNA和SOCS1蛋白的表达量显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 构建的pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCS1的表达,为进一步研究DCs增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗荣城	南方医科大学南方医院肿瘤中心	287	1892	18.0	29.0
2	吕成伟	南方医科大学南方医院肿瘤中心	37	135	7.0	8.0
3	阮健	南方医科大学南方医院肿瘤中心	20	90	6.0	8.0
4	涂微	南方医科大学南方医院肿瘤中心	1	1	1.0	1.0