果蝇Bves蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 任恋 吴秀山 周英 彭佩莹 戴国 戴悦 曾群 王静 袁婺洲 赵阳 邓云 郝建军 陈思行
• 来源期刊: 中南医学科学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Bves 果蝇 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 221-224,246
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 2943字
• 语种: 中文

摘要

目的 为了进一步研究细胞粘附分子Bves在肿瘤的发生及转移过程中的作用,需要获得Bves蛋白并制备其抗体.方法 根据Flybase网站所提供的Bves基因序列,以果蝇的总RNA为模板进行PCR扩增,得到Bves部分编码序列,随后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体.重组表达质粒经酶切测序鉴定后,转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导融合蛋白的表达,使用活化的Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化后得到的His-Bves融合蛋白免疫注射新西兰大白兔制备Bves多克隆抗体,并用Western blot对抗体效价进行检测.结果和结论获得了Bves原核表达重组融合蛋白及高效价的兔抗Bves多克隆抗体,为后期深入研究Bves基因的功能奠定了基础.