鸭IFN-γ,IL-2mRNA荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

• 作者: 张盼涛 曾显营 李倩倩 杨婧 田国彬 陈化兰
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ 细胞因子 SEA 禽流感灭活疫苗
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 472-476
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4
• 字数: 3490字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.2013.06.11

摘要

为评价疫苗免疫对鸭细胞免疫应答反应的影响,本研究提取鸭脾脏组织总RNA,采用鸭IFN-γIL-2、GAPDH基因特异性引物,建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.结果显示IFN-γ、IL-2、GAPDH基因扩增标准曲线相关系数均高于0.99；3者扩增效率相近,均接近于100％；融解曲线呈特异性单峰；各基因组内和组间变异系数均小于2％.应用该方法检测不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷鸭后脾脏组织IFN-γ和IL-2 mRNA的相对表达水平.结合免疫后抗体水平及攻毒保护结果,比较不同佐剂对禽流感灭活疫苗免疫应答的影响.结果显示,金黄色葡萄球菌毒素A重组蛋白(rSEA)佐剂组IFN-γ和IL-2 mRNA表达水平显著高于其他免疫组(P＜0.05).结果表明,建立的qRT-PCR特异性、重复性和稳定性良好,能够快速、准确检测鸭体内细胞因子的表达水平,为进一步评价疫苗免疫效果奠定了基础.