酸性神经酰胺酶shRNA表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘玉和 肖水芳 邓文敏
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉头颈外科
• 关键词: RNA,小分子干扰 肿瘤,鳞状细胞 酸性神经酰胺酶
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 235-238
• 页数: 4页
• 字数: 3296字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建特异性抑制人酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)基因表达的短发夹RNA (shorthairpin RNA,shRNA)载体,筛选出基因沉默效果最明显的shRNA,以明了shRNA对头颈肿瘤细胞AC表达的影响.方法 针对人AC基因设计并构建4个shRNA质粒,转染人肾上皮细胞系293T细胞,通过实时定量PCR及Western blot的方法筛选出沉默效果最明显的shRNA序列,以该序列构建慢病毒载体感染人鼻咽癌CNE-2Z细胞及人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,验证其对这些细胞的基因沉默效果.结果 4个shRNA质粒转染293T细胞后AC mRNA及蛋白表达均降低,其中sh1340的抑制效果最明显.sh1340慢病毒感染肿瘤细胞后AC基因沉默的效果分别为CNE-2Z (79.3±0.5)％和Hep-2(80.7±5.1)％.结论 成功构建特异性抑制AC表达的shRNA表达载体,为进一步研究AC的功能及头颈肿瘤的基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖水芳	北京大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科	78	383	11.0	16.0
2	刘玉和	北京大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科	58	207	6.0	12.0
3	邓文敏	北京大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科	1	1	1.0	1.0