施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: Wernike Kerstin 冯春燕 吕继洲 吴绍强 张永宁 林祥梅 王彩霞 袁向芬 邓俊花
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 施马伦贝格病毒 核衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫亲和层析
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1629-1636
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 6269字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.10.017

摘要

本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体.以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒.经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His-SBV-N融合蛋白.在非变性条件下用Ni NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗.经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定.结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30 ku; (2)制备的多抗效价高达1:64 000.该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应.His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础.