增强型绿色荧光蛋白-神经标识真核表达载体构建及在细胞内的表达

• 作者: 丁渭 乔录新 吴昊 宋凤丽 张彤 张玉林 徐树莹 陈德喜
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 增强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 神经突起 神经标识 形态学
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 439-443
• 页数: 5页
• 分类号: Q291
• 字数: 4151字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2013.05.002

摘要

目的 构建可转染神经胶质细胞和神经元的增强型绿色荧光蛋白-神经标识(EGFP-ID)真核表达载体,为神经突起损伤活体研究提供技术方法. 方法 采用PCR方法分别从质粒pEGFP-N1载体和大鼠脑组织基因组DNA中扩增EGFP和ID序列.通过T4 DNA连接酶将纯化后的PCR产物EGFP与经过BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切的pcDNA4.1-hisB载体连接.将经克隆测序确定的pcDNA4.1-EGFP经由NotⅠ和Xba Ⅰ双酶切并与纯化的PCR产物ID连接,再次克隆测序确定为pcDNA4.1-EGFP-ID.将pcDNA4.1-EGFP与pcDNA4.1-EGFP-ID在转染试剂Fugene6 介导下转染人神经胶质瘤U87细胞和小鼠原代培养神经元,通过倒置荧光显微镜观察EGFP在2种细胞内的分布.此外,用50 μmol/L核苷类似物司他夫定处理神经元8d,第8天末观察EGFP-ID 示踪细胞突起发育情况,并与免疫荧光检测结果作比较. 结果 成功扩增得到EGFP和ID基因片段,重组得到EGFP-ID真核表达载体,该载体携带的EGFP基因在U87细胞和神经元内表达并布满细胞突起,示踪神经元突起形态变化的结果与免疫荧光观察结果一致. 结论 pcDNA4.1-EGFP-ID能够介导EGFP基因在神经元和胶质细胞突起内表达,从而直观再现神经突起形态特征.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玉林	首都医科大学附属北京佑安医院感染科	55	148	7.0	8.0
2	吴昊	首都医科大学附属北京佑安医院感染科	341	1409	17.0	25.0
3	张彤	首都医科大学附属北京佑安医院感染科	167	690	14.0	20.0
4	丁渭		1	0	0.0	0.0
5	徐树莹		1	0	0.0	0.0
6	宋凤丽		1	0	0.0	0.0